Dab2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400979-ACT

Disabled homolog 2（DAB2）は、クラスリン介在性エンドサイトーシスによる取り込みを受容体のトラフィッキングおよびシグナル減衰に結び付けるエンドサイトーシスアダプタータンパク質であるDab2をコードします。Dab2は、膜近傍のタンパク質複合体を組織化することで、TGF-βシグナルの制御、Wnt/β-カテニン経路の調節、ならびにインテグリン依存的な細胞接着・遊走を調節する経路に関与します。上皮極性、分化プログラム、増殖因子受容体のターンオーバーへの影響を介して、DAB2発現の変化は、複数の組織環境において腫瘍進展の表現型や転移関連の細胞挙動と関連付けられてきました。さらにDab2は、細胞外からの刺激に対する細胞応答性に影響する、より広範な小胞輸送プロセスにも寄与します。

Dab2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DAB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dab2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DAB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDAB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dab2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDAB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDab2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDAB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDab2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。