D930020B18Rik CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432083-ACT

D930020B18Rik は、まだ十分に特徴づけられていないマウス由来タンパク質をコードしており、既存のアノテーションからは、明確に整理された特定のシグナル伝達モジュールというより、細胞の基本的な恒常性維持に関わる可能性が示唆されています。発現遺伝子座として、注釈情報の乏しい遺伝子の制御変化が転写調節、RNA プロセシング、あるいはタンパク質代謝回転への寄与を明らかにし得ることから、トランスクリプトーム解析や機能ゲノミクス研究でしばしば検討対象となります。未同定の RIKEN cDNA の発現変動は、増殖・分化・細胞ストレス応答といった疾患関連の文脈で二次的所見として観察されることが多く、探索的ターゲットとしての有用性を裏づけます。D930020B18Rik を調べることで、表現型プロファイリングやマルチオミクス統合を通じて遺伝子ネットワークモデルの精緻化や経路間のつながりの同定に役立ちます。

D930020B18Rik CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性D930020B18Rikの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

D930020B18Rik CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における D930020B18Rik 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はD930020B18Rik転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性D930020B18Rikの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のD930020B18Rik遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるD930020B18Rik依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびD930020B18Rik発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるD930020B18Rik経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。