CYYR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404421-ACT

O CYYR1 humano (proteína 1 rica em cisteína e tirosina) codifica uma proteína pequena, de baixa complexidade, enriquecida em cisteína/tirosina, implicada na regulação da sinalização celular e de programas transcricionais adaptativos ao stress. A expressão de CYYR1 tem sido descrita como responsiva a estímulos inflamatórios e ao stress celular, sugerindo um papel na coordenação de crosstalk entre vias que influencia a organização do citoesqueleto, a sinalização associada à adesão e a expressão génica dependente do contexto. Como potencial modulador de respostas transcricionais induzidas por estímulos, o CYYR1 é de interesse para dissecar mecanismos que acoplam sinais extracelulares a redes regulatórias a jusante. A desregulação da expressão de CYYR1 foi observada em perfis de expressão associados a doença, apoiando a sua utilidade como alvo de investigação em estudos de fenótipos ligados à inflamação e a estados de sinalização associados a tumores.

CYYR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYYR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYYR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYYR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYYR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYYR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYYR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYYR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYYR1 em células tumorais com expressão de CYYR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.