Cytokeratin 7 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400628-NIC

KRT7 codifica a citoqueratina 7, uma proteína de filamento intermediário do tipo II que forma heteropolímeros obrigatórios com queratinas do tipo I para construir a rede do citoesqueleto de muitos epitélios simples. A citoqueratina 7 contribui para a arquitetura das células epiteliais, a resistência mecânica e a polaridade ao sustentar a organização das junções e coordenar a comunicação entre componentes do citoesqueleto durante a diferenciação e as respostas ao estresse. Padrões alterados de expressão de KRT7 são frequentemente avaliados em estudos de identidade de linhagem epitelial e de remodelação, incluindo processos ligados à migração celular e à integridade tecidual. A desregulação das redes de queratinas pode influenciar a homeostase epitelial e é comumente investigada na biologia tumoral e em modelos de lesão inflamatória como um marcador de mudanças no estado epitelial.

Cytokeratin 7 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KRT7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KRT7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KRT7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KRT7 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.