Cytokeratin 7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400628-ACT

KRT7 codifica a citoqueratina 7, uma proteína de filamento intermédio do tipo II que se associa a queratinas do tipo I para formar o citoesqueleto de queratina em epitélios simples. A citoqueratina 7 contribui para a integridade estrutural, a polaridade e a resistência mecânica das células epiteliais, e a sua organização é remodelada durante a diferenciação, a resposta a feridas e a sinalização de stress. Padrões alterados de expressão de KRT7 são amplamente utilizados para estudar a identidade de linhagem epitelial e a reprogramação do citoesqueleto em contextos como a caracterização de subtipos de carcinoma e a transição epitélio–mesênquima. Como as redes de queratina interagem com complexos juncionais e com o tráfego intracelular, KRT7 também é relevante para investigar a função de barreira epitelial e a dinâmica de sinalização associada ao citoesqueleto.

Cytokeratin 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cytokeratin 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cytokeratin 7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cytokeratin 7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cytokeratin 7 em células tumorais com expressão de KRT7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.