cytochrome c Plasmide Double Nickase (m): sc-419891-NIC

Mouse Cycs codifica il citocromo c, una proteina eme altamente conservata che trasferisce elettroni tra i complessi III e IV della catena respiratoria mitocondriale e sostiene la fosforilazione ossidativa e la produzione di ATP. Oltre alla bioenergetica, il citocromo c partecipa all’apoptosi intrinseca promuovendo l’assemblaggio dell’apoptosoma e l’attivazione delle caspasi in seguito alla permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna. La funzione di Cycs si interseca con l’omeostasi mitocondriale, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e le risposte allo stress metabolico che influenzano le decisioni di sopravvivenza cellulare. La deregolazione della segnalazione del citocromo c è ampiamente utilizzata come readout molecolare negli studi su neurodegenerazione, danno da ischemia–riperfusione, attivazione delle cellule immunitarie e metabolismo delle cellule tumorali.

cytochrome c Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cycs nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cycs. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cycs. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cycs interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.