cytochrome c Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417607

Panoramica

CYCS codifica il citocromo c umano, un trasportatore di elettroni contenente un gruppo eme nello spazio intermembrana mitocondriale, che trasferisce elettroni tra il complesso III (citocromo bc1) e il complesso IV (citocromo c ossidasi) per sostenere la fosforilazione ossidativa e la produzione cellulare di ATP. Oltre alla bioenergetica, il citocromo c è un mediatore centrale dell’apoptosi intrinseca: la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna ne consente il rilascio nel citosol e la successiva formazione dell’apoptosoma con APAF1 e la caspasi-9. La funzione di CYCS si intreccia con l’omeostasi redox, la dinamica mitocondriale e la segnalazione di risposta allo stress, rendendolo ampiamente rilevante negli studi sulla disfunzione mitocondriale. Alterazioni della respirazione dipendente dal citocromo c e della competenza apoptotica vengono spesso esaminate in contesti quali neurodegenerazione, danno cardiometabolico e fenotipi di sopravvivenza delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYCS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYCS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYCS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cytochrome c.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYCS per lo studio della segnalazione di cytochrome c, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYCS critici per la funzione di cytochrome c
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYCS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cytochrome c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cytochrome c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYCS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cytochrome c Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cytochrome c (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYCS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYCS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.