cytochrome b5 Double Nickaseプラスミド (m): sc-430951-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- cytochrome b5 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- cytochrome b5ダブルニカースプラスミド（m）およびcytochrome b5ダブルニカースプラスミド（m2）は、Cyb5aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
cytochrome b5 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-430951-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのCyb5aは、膜結合型のヘムタンパク質であるシトクロムb5をコードしており、小胞体においてシトクロムP450酵素、脂肪酸不飽和化酵素、ならびに脂肪酸伸長系へ電子を受け渡します。これらの相互作用を介して、シトクロムb5は外来性化合物および内因性基質の酸化代謝、ステロイドおよび脂質の生合成、そして細胞内のレドックス恒常性を支えています。Cyb5aの活性は、酸化ストレスに対する細胞応答や薬物・ホルモンの代謝処理に影響し、肝機能や全身の脂質バランスに関わる経路と結びついています。シトクロムb5依存的な電子伝達の異常は、脂質代謝の破綻やP450媒介酸化の乱れと関連づけられており、Cyb5aは代謝・毒性モデルにおける機序解析に有用な結節点となります。
cytochrome b5 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cyb5a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cyb5a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cyb5aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cyb5aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。