Cystinosin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429900

Panoramica

Ctns codifica la cistinosina, un trasportatore lisosomiale di cistina dipendente dal gradiente di H+ che media l’efflusso di cistina dal lume lisosomiale al citosol, collegando il trasporto lisosomiale all’equilibrio redox cellulare e all’omeostasi degli amminoacidi. La perdita dell’attività della cistinosina altera la funzione dei lisosomi, favorisce l’accumulo di cistina e modifica vie coinvolte nella dinamica autofagia–lisosoma, nelle risposte allo stress ossidativo e nell’adattamento metabolico. Nei modelli murini, l’inattivazione di Ctns è ampiamente utilizzata per riprodurre i meccanismi alla base dei fenotipi da accumulo di cistina e per esaminare come i difetti del trasporto lisosomiale rimodellino la segnalazione cellulare di stress. Questi processi sono rilevanti per comprendere come le reti di traffico e degradazione centrate sui lisosomi influenzino l’omeostasi tissutale in tipi cellulari di interesse renale, oculare e immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cystinosin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ctns in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ctns insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ctns a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cystinosin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ctns per lo studio della segnalazione di Cystinosin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ctns critici per la funzione di Cystinosin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ctns per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cystinosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cystinosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ctns. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cystinosin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cystinosin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ctns per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ctns definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.