CysLT₁ Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416516-ACT

CYSLTR1 codifica o receptor humano 1 de leucotrienos cisteinílicos (receptor CysLT1), um receptor acoplado à proteína G que se liga a LTC4, LTD4 e LTE4 para transduzir sinais de mediadores lipídicos inflamatórios. Após a ativação, ele se acopla principalmente a Gq/11 para estimular a sinalização da fosfolipase C, a mobilização de Ca2+ intracelular e programas transcricionais a jusante ligados a MAPK e NF-κB, que regulam quimiotaxia, permeabilidade vascular e contratilidade do músculo liso. A atividade de CYSLTR1 se cruza com as vias de biossíntese do ácido araquidônico/leucotrienos e molda a comunicação entre leucócitos e estroma em tecidos inflamados. A desregulação da sinalização do receptor CysLT1 tem sido associada à inflamação e ao remodelamento das vias aéreas, a respostas alérgicas e a patologias mais amplas mediadas pelo sistema imune, o que sustenta seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre inflamação.

CysLT1 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYSLTR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CysLT1 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYSLTR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYSLTR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CysLT1 Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYSLTR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CysLT1 Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CysLT1 Receptor em células tumorais com expressão de CYSLTR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.