Cyr61/CCN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400366-ACT

CYR61は、分泌型で細胞外マトリックスに関連するマトリセルラータンパク質であるCyr61/CCN1をコードしており、インテグリンおよびヘパラン硫酸プロテオグリカンに結合することで、細胞—マトリックス間相互作用を調節します。Cyr61/CCN1は接着、遊走、増殖、生存に影響を与え、フォーカルアドヒージョン、MAPK/ERK、PI3K–AKT、ならびにYAP/TAZを介したメカノトランスダクションなど、血管新生および炎症プログラムにまたがるシグナル伝達を統合します。即時早期応答遺伝子として、CYR61は増殖因子や組織ストレスにより迅速に誘導され、創傷修復や血管リモデリングの形成に寄与します。CYR61発現の異常は、線維化、異常な新生血管形成、腫瘍微小環境の生物学と関連づけられており、がん、心血管疾患、炎症性疾患研究における機構的ハブとしての利用を支持しています。

Cyr61/CCN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYR61の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cyr61/CCN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYR61 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYR61転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cyr61/CCN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYR61遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCyr61/CCN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYR61発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCyr61/CCN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。