CYP2D6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404098-ACT

CYP2D6は、シトクロムP450 2D6をコードしており、小胞体内で内在性基質および外因性化合物（ゼノバイオティクス）の幅広い基質に対する酸化的生体変換を触媒する、ミクロソーム型モノオキシゲナーゼです。シトクロムP450依存性代謝ネットワークの一部として、CYP2D6はCYP450レダクターゼを介したレドックスサイクリングおよびNADPH依存的な電子伝達に影響し、生理活性代謝物に対する細胞の曝露を形作ります。CYP2D6の遺伝的多型と状況依存的な発現は、薬物代謝能や化学物質感受性における個人差を規定する主要因です。したがって、CYP2D6活性の異常は、ファーマコゲノミクス研究、毒性学、ならびに代謝活性化とクリアランスの機序モデルにおいて重要な意味を持ちます。

CYP2D6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2D6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2D6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2D6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2D6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2D6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2D6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2D6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2D6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2D6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。