CYP2A6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403448-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CYP2A6 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CYP2A6ダブルニカースプラスミド（h）およびCYP2A6ダブルニカースプラスミド（h2）は、CYP2A6を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CYP2A6 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403448-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2A6 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403448-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトCYP2A6は、小胞体膜に局在するシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしており、多様な外因性化合物（ゼノバイオティクス）および内因性基質の酸化的代謝を触媒することで、肝臓の解毒能と薬物クリアランスの個体間差に寄与する。CYP2A6はニコチンのC酸化によるコチニン生成の主要な触媒であると同時に、NADPH–シトクロムP450還元酵素依存的な電子伝達を介して、複数の環境化学物質の代謝的活性化／不活化にも関与する。その活性は、レドックスバランスや求電子性物質の処理を制御する経路を含む、ゼノバイオティクス応答ネットワークおよび肝臓の代謝恒常性と連関している。CYP2A6の遺伝子多型や発現変動は、ニコチン依存に関する表現型のばらつきや、毒性物質誘発性の組織ストレスに対する感受性の差と関連づけられており、薬理ゲノミクスおよび毒性学研究における活用を支持している。
CYP2A6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYP2A6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYP2A6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYP2A6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYP2A6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。