CYP21A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402919-ACT

CYP21A2 は、シトクロム P450 21-ヒドロキシラーゼをコードしており、副腎でのステロイド産生に必須の、小胞体関連型のモノオキシゲナーゼです。コルチゾールおよびアルドステロン前駆体の生合成における 21 位水酸化反応を触媒することで、CYP21A2 は電解質バランスやストレス応答性の内分泌シグナルを形作る糖質コルチコイド／鉱質コルチコイド経路の調節に寄与します。CYP21A2 の発現量や活性が変化すると、副腎皮質を流れるステロイドホルモンのフラックスが乱れ、核内ホルモン受容体によって制御される下流の転写プログラムに影響を及ぼします。本遺伝子の調節異常は先天性副腎過形成の表現型と強く関連しており、内分泌遺伝学およびステロイド代謝研究で頻繁に解析されています。

CYP21A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP21A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP21A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP21A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP21A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP21A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP21A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP21A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP21A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP21A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。