CYP1A1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419897-NIC

O gene Cyp1a1 de camundongo codifica o citocromo P450 1A1 (CYP1A1), uma monooxigenase microssomal que catalisa o metabolismo oxidativo de xenobióticos e de substratos endógenos, incluindo a bioativação e a desintoxicação de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos. O CYP1A1 é um efetor downstream canônico da sinalização do receptor de hidrocarbonetos aromáticos (AHR), conectando ligantes ambientais a programas transcricionais que regulam o metabolismo de fase I e se coordenam com vias de conjugação de fase II. Sua atividade influencia o equilíbrio redox celular por meio da formação de metabólitos reativos e da modulação de respostas ao estresse oxidativo, com implicações para a sinalização de dano ao DNA e a inflamação. A expressão ou atividade desregulada de CYP1A1 é frequentemente usada como biomarcador de perturbações na via de AHR e é relevante para estudos de suscetibilidade a tóxicos, metabolismo de carcinógenos e adaptação metabólica específica de tecido.

CYP1A1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Cyp1a1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Cyp1a1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Cyp1a1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Cyp1a1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.