CYP1A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419897-ACT

O gene murino Cyp1a1 codifica a enzima do citocromo P450 CYP1A1, uma mono-oxigenase dependente de heme que catalisa o metabolismo oxidativo de xenobióticos e de substratos endógenos. A sua transcrição é fortemente induzida a jusante da sinalização do receptor de hidrocarbonetos arílicos (AHR), ligando ligantes ambientais à biotransformação de fase I e às vias subsequentes de desintoxicação. A atividade da CYP1A1 influencia o equilíbrio redox celular e pode modular a produção de espécies reativas de oxigénio durante a conversão dos substratos, cruzando-se com programas de resposta ao stress e com a sinalização inflamatória. A expressão ou atividade desregulada da CYP1A1 tem sido associada a alterações na suscetibilidade a químicos e a processos relevantes para a carcinogénese, sustentando a sua utilização em toxicologia, biologia da exposição e estudos de interação gene–ambiente.

CYP1A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyp1a1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP1A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyp1a1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyp1a1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP1A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyp1a1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP1A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP1A1 em células tumorais com expressão de Cyp1a1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.