CYP1A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400511-ACT

ヒトCYP1A1は、シトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしており、多環芳香族炭化水素やステロイド様分子を含む外因性化合物および内因性基質の酸化的代謝を触媒する。その転写はアリールハイドロカーボン受容体（AHR）シグナル伝達軸によって強く制御されており、CYP1A1はリガンド誘導性の解毒およびレドックス恒常性プログラムにおける主要なエフェクターとして位置づけられる。CYP1A1活性は、生体内活性化およびクリアランス経路に影響し、環境曝露、酸化ストレス、炎症性シグナルに対する細胞応答を規定する。CYP1A1の発現変動は、化学物質感受性の個人差や、発がん物質代謝および疾患感受性に関連する機序との関与が示唆されている。

CYP1A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP1A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP1A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP1A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP1A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP1A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP1A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP1A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP1A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP1A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。