CYP19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400604-ACT

ヒトのCYP19A1はアロマターゼ（CYP19）をコードしており、これはアンドロゲンをエストロゲンへ変換することで、エストロゲン生合成の最終段階を触媒するシトクロムP450酵素である。この小胞体局在型モノオキシゲナーゼは、NADPH依存的な電子伝達を統合し、内分泌組織および末梢組織にわたるステロイドホルモン恒常性の維持に寄与する。CYP19A1活性はエストロゲン受容体（ER）シグナル伝達ネットワークと、増殖・分化・代謝調節を形作る転写プログラムに影響を与える。アロマターゼ発現の破綻はホルモン依存性の表現型に関与し、ステロイド産生の変化、内分泌フィードバックループ、ならびに疾患関連のシグナル状態の間を結び付ける機序的なリンクとなる。

CYP19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP19A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP19A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP19A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP19A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP19A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。