CYP11B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403040-ACT

CYP11B1 codifica a citocromo P450 11β-hidroxilase, uma monooxigenase mitocondrial que catalisa etapas finais da esteroidogênese adrenal, incluindo a conversão de 11-desoxicortisol em cortisol e de 11-desoxicorticosterona em corticosterona. Essa enzima atua em reações redox dependentes de heme que exigem transferência de elétrons a partir de adrenodoxina/adrenodoxina redutase, conectando o metabolismo mitocondrial à produção hormonal. A atividade de CYP11B1 influencia a regulação do eixo hipotálamo–hipófise–adrenal e programas transcricionais a jusante responsivos a glicocorticoides e mineralocorticoides. Alterações na expressão ou na função de CYP11B1 estão associadas a fenótipos de hiperplasia adrenal congênita e contribuem para desregulação endócrina relevante para a modelagem de distúrbios adrenais e estados patológicos impulsionados por esteroides.

CYP11B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP11B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP11B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP11B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP11B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP11B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP11B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP11B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP11B1 em células tumorais com expressão de CYP11B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.