cyclin G2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403620-ACT

CCNG2はサイクリンG2をコードしており、サイクリンG2は細胞周期の進行および細胞増殖を主として負に制御する非典型的サイクリンである。サイクリンG2は増殖抑制性シグナルやストレス刺激によって誘導され、サイクリン依存性キナーゼ活性を調節するとともに、p53依存性応答やホスファターゼ関連の制御ネットワークなどの経路からのシグナルを統合することで、チェックポイント制御に寄与する。G1/S移行、分化、アポトーシス感受性への影響を通じて、CCNG2の発現は、がんやその他の増殖性疾患でみられる細胞周期制御の異常という文脈で頻繁に研究されている。さらに、CCNG2の制御異常は腫瘍モデルにおいて浸潤や転移関連表現型、治療応答に関わる経路の変化とも関連づけられており、増殖抑制機構の解明研究において重要である。

cyclin G2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCNG2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cyclin G2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCNG2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCNG2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cyclin G2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCNG2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcyclin G2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCNG2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcyclin G2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。