cyclin F CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401505-ACT

ヒトのCCNFはサイクリンFをコードしており、サイクリンFはF-boxタンパク質としてSCF（Cyclin F）E3ユビキチンリガーゼ複合体の基質認識サブユニットとして機能し、細胞周期の進行とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を結び付けています。サイクリンFは、DNA複製ライセンシング、中心体の生物学、ゲノム完全性を制御する主要因子のユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）を調節することで、S期からG2期への移行に伴う事象を協調させ、複製ストレスを抑制します。これらの機能を通じて、CCNFはDNA損傷応答、ユビキチンシグナル伝達、細胞周期チェックポイント制御を司る経路と連携します。サイクリンFを介した基質ユビキチン化の制御異常は、ゲノム維持の変化と関連することが示されており、増殖性疾患や神経変性の文脈で研究されています。

cyclin F CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCNFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cyclin F CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCNF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCNF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cyclin Fの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCNF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcyclin F依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCNF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcyclin F経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。