Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cyclin D1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400047-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin D1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin D1 Double Nickase Plasmid (h) e il cyclin D1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCND1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin D1 Antibody (A-12): sc-8396
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin D1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin D1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCND1 codifica la ciclina D1, un regolatore chiave della transizione del ciclo cellulare G1/S che si associa a CDK4/6 per fosforilare RB1 e promuovere la trascrizione dipendente da E2F. La ciclina D1 integra segnali mitogenici provenienti da vie come RAS–MAPK e PI3K–AKT, collegando gli stimoli extracellulari all'ingresso nel ciclo cellulare, alla proliferazione e alla differenziazione. Un'espressione deregolata di CCND1 o l'aumento del numero di copie è frequentemente associato, in molteplici contesti tumorali, ad alterazioni del controllo dei checkpoint, a programmi trascrizionali modificati e a instabilità genomica, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di segnalazione del ciclo cellulare e oncogeniche.
cyclin D1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCND1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCND1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCND1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCND1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.