CYB5R3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404764-NIC

CYB5R3は、NADH依存性のフラボタンパク質であるシトクロムb5レダクターゼ3をコードしており、シトクロムb5やその他の受容体へ電子を受け渡すことで、ヘム代謝および脂質代謝を支えます。細胞内のレドックス恒常性に寄与し、還元型補因子の維持を通じて、脂肪酸の不飽和化／伸長、コレステロール生合成、酸化ストレスからの防御といった経路に影響します。CYB5R3活性はまた、赤血球におけるメトヘモグロビン還元とも関連し、さらにミトコンドリアおよび小胞体における電子伝達過程のより広範な調節にも関与します。CYB5R3の遺伝学的または機能的な障害は、メトヘモグロビン血症やそれに関連するレドックス不均衡の表現型と関連づけられており、電子伝達不全や代謝ストレス応答を研究するうえで重要です。

CYB5R3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYB5R3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYB5R3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYB5R3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYB5R3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。