CUG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417019-ACT

CENPW（別名CUG2）は、有糸分裂においてキネトコアの適切な組み立てと染色体の正確な分配に必須となる、セントロメア関連因子の中核成分をコードします。CUG2はセントロメアクロマチンの構造形成に関与し、スピンドル（紡錘体）チェックポイントの完全性を支えることで、細胞周期の進行およびゲノム安定性の維持と結び付いています。セントロメアやキネトコア構成要素の発現異常は、しばしば異数性や増殖制御の破綻と関連するため、CENPWは染色体不安定性の機構を研究するうえで有用な焦点（ノード）となります。ヒト細胞では、CUG2機能の攪乱は、一般に有糸分裂制御、分配エラーに対するDNA損傷応答、ならびにがんに関連する増殖表現型の文脈で検討されます。

CUG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CENPWの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CUG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CENPW 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCENPW転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CUG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCENPW遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCUG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCENPW発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCUG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。