CTPS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403505-ACT

CTPS1（CTP合成酵素1）は、de novo（新規）シチジンヌクレオチド生合成における律速酵素であり、ATP依存的にUTPをCTPへ変換する反応を触媒します。この過程で、グルタミンアミドトランスフェラーゼ活性をピリミジン代謝に結び付けています。CTPS1は細胞内CTPプールを制御することで、DNA/RNA合成、リン脂質産生、増殖に連動した代謝プログラムを支え、ヌクレオチド恒常性や細胞周期進行と緊密に統合されています。CTPS1活性や、cytoophidia（サイトオフィディア）フィラメントへの集合を含むピリミジン生合成の制御異常は、複製ストレス応答や細胞の増殖能に影響を与え得ます。ヌクレオチド代謝の破綻は、悪性形質転換や免疫細胞活性化の文脈でしばしば研究されており、CTPS1は代謝依存性や増殖の転写制御を検証するための有用な標的となります。

CTPS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTPS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTPS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CTPS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTPS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTPS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTPS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTPS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTPS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTPS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。