CTL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402652-ACT

SLC44A2は、コリン輸送体様タンパク質2（CTL2）をコードしており、細胞へのコリン取り込みおよび膜の生合成やシグナル伝達を支えるリン脂質代謝に関与する多回膜貫通型トランスポーターです。CTL2の活性は、ホスファチジルコリン合成に必要なコリンの利用可能性を調節することで、脂質恒常性、ミトコンドリア機能、ストレス応答を制御する経路と結び付いています。SLC44A2の発現は、炎症や血栓形成に関連する過程を含む、骨髄系細胞および内皮細胞の生物学と関連づけられてきました。遺伝学的・免疫学的研究により、CTL2は血液学的および血管系の表現型と関連することが示されており、疾患関連の細胞モデルにおける機序解明研究の有用な標的となっています。

CTL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC44A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC44A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC44A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC44A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC44A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。