CtBP2 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-401865-ACT-2

ヒトCTBP2はC末端結合タンパク質2（CtBP2）をコードしており、CtBP2はNADH感受性の転写コリプレッサーとして、DNA結合因子と協調してクロマチン修飾複合体をリクルートすることで遺伝子発現を調節する。CtBP2は細胞運命決定、上皮間葉転換（EMT）、細胞周期制御、アポトーシスに関連するプログラムを制御し、発生過程やストレス応答経路全体にわたり、代謝状態を転写出力に統合する。CTBP2活性の破綻は、複数のがんの文脈において腫瘍性の転写ネットワークの変化や異常な分化と関連づけられており、腫瘍進展および転移の機序研究において重要である。CTBP2の遺伝子編集は、コリプレッサー依存的なクロマチン制御の機能解析、転写回路のマッピング、ならびにレポーターアッセイ、オミクス解析、摂動スクリーニングを用いた経路依存性の検証を可能にする。

CtBP2 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTBP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CtBP2 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CTBP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTBP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CtBP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTBP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCtBP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTBP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCtBP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。