Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) CSA: sc-403428-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CSA consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CSA (h) y el plásmido de doble nickasa CSA (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ERCC8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CSA Anticuerpo (D-2): sc-376981
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CSA | sc-403428-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CSA | sc-403428-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC8 codifica la proteína humana CSA, un factor con repeticiones WD40 que forma el complejo ligasa E3 de ubiquitina CRL4CSA junto con DDB1, CUL4A y RBX1 para coordinar la reparación por escisión de nucleótidos acoplada a la transcripción (TC-NER). CSA ayuda a resolver lesiones que detienen a la ARN polimerasa II al reclutar actividades de reparación y remodelación de la cromatina y al promover la eliminación dependiente de ubiquitina de componentes de la respuesta al daño. A través de estas funciones, CSA contribuye a la estabilidad del genoma, a la recuperación de la transcripción tras el daño inducido por UV y al mantenimiento de la homeostasis celular bajo estrés genotóxico. La alteración patogénica de ERCC8 se asocia con el síndrome de Cockayne del grupo A, un trastorno de reparación del ADN utilizado como modelo para estudiar defectos de la TC-NER, el estrés transcripcional y la vulnerabilidad del neurodesarrollo.
CSA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.