CRF Double Nickaseプラスミド (h): sc-400770-NIC

ヒトCRHは、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（CRF）をコードしており、生理的および心理的ストレスに対する視床下部—下垂体—副腎（HPA）軸応答を開始する主要な神経ペプチドである。CRHR1/CRHR2を介したCRFシグナル伝達はcAMP/PKA経路と、その下流にあるCREB依存的な転写制御を活性化し、内分泌出力、自律神経機能、ならびに行動適応の形成に関与する。中枢神経系にとどまらず、末梢組織においてもCRH/CRFは免疫活性や炎症シグナルを調節しうる。CRH–CRF経路の調節異常は、ストレス関連の神経精神症状や神経内分泌恒常性の変化に関与するとされ、気分・不安に関わる神経回路、睡眠調節、代謝適応などの文脈で研究されている。

CRF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CRH 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CRH内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CRHの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CRHが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。