CRABP-I CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405485-ACT-2

ヒトCRABP1は、細胞内レチノイン酸結合タンパク質I（CRABP-I）をコードしており、これは全トランス型レチノイン酸に高親和性で結合する細胞質内キャリアとして、レチノイン酸を緩衝しつつ輸送することで、レチノイド依存性シグナル伝達に利用可能なレチノイン酸量を調節している。CRABP-Iはレチノイン酸の細胞内分布と代謝を制御することで、レチノイン酸受容体により統御される転写プログラムに影響を与え、細胞分化・増殖・発生パターン形成を制御する経路とも交差する。CRABP1の発現変化やレチノイドの取り扱い異常は、複数のがんや神経発達・神経変性の文脈で観察されるレチノイン酸（RA）シグナルの破綻に関与するとされ、レチノイド恒常性が細胞運命やストレス応答に影響することが示唆されている。CRABP1の遺伝子編集ツールは、適切なヒト細胞モデルにおいて、レチノイド輸送ダイナミクス、RA応答性トランスクリプトーム、およびシグナル経路間クロストークの機序解明を可能にする。

CRABP-I CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CRABP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CRABP-I CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CRABP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCRABP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CRABP-Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCRABP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCRABP-I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCRABP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCRABP-I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。