CPTII Double Nickaseプラスミド (h): sc-403401-NIC

カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ2（CPT2）はCPTIIをコードしており、CPTIIはミトコンドリア内膜に存在する酵素で、長鎖アシルカルニチンをアシルCoAへと再変換し、β酸化への取り込みを可能にします。この段階は脂肪酸分解の中核であり、脂質由来のアセチルCoAをTCA回路へ統合すること、ならびに代謝需要の高い組織における細胞エネルギー恒常性の維持に重要です。CPTII活性はミトコンドリアのレドックスバランスと脂質フラックスに影響し、酸化的代謝や代謝ストレス応答を制御するより広範な経路とも関連します。病的なCPT2変異は長鎖脂肪酸酸化障害と関連しているため、CPTIIはエネルギー代謝、ミトコンドリア機能、脂質誘導性の細胞表現型に関する機序研究における重要な標的となっています。

CPTII ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CPT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CPT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CPT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CPT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。