CPTI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401811-ACT

ヒトCPT1Aは、カルニチン・パルミトイルトランスフェラーゼ1A（CPTI）をコードしており、β酸化のために長鎖脂肪酸をミトコンドリアへ取り込ませる入口を制御する、ミトコンドリア外膜上の律速酵素である。CPTIはアシルカルニチンの形成を調節することで、細胞のエネルギー需要と脂質分解を統合し、栄養状態のセンシングとミトコンドリアの酸化的代謝を結び付ける。CPT1A活性は脂肪酸酸化、ケトン体生成、代謝ストレス応答などの経路に影響し、その調節異常は脂質異常症、インスリン抵抗性、肝臓の代謝機能障害との関連が報告されている。ミトコンドリアにおける脂質フラックスの要所として、CPT1Aはヒト細胞における代謝リモデリングやエネルギー恒常性の文脈で頻繁に研究対象となっている。

CPTI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CPT1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CPTI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CPT1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCPT1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CPTIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCPT1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCPTI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCPT1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCPTI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。