CPT1-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402510-ACT

O CPT1C humano codifica a carnitina palmitoiltransferase 1C (CPT1-C), um membro atípico da família CPT1, enriquecido no sistema nervoso, que conecta o metabolismo lipídico à energia celular e à homeostase redox. Diferentemente das CPT1A/B mitocondriais, que impulsionam diretamente a β-oxidação de ácidos graxos de cadeia longa, acredita-se que a CPT1-C atue como um sensor metabólico, influenciando o manejo de lipídios, as respostas ao estresse do retículo endoplasmático (RE) e a sinalização associada a AMPK e mTOR, que acopla o estado nutricional à função neuronal. A atividade da CPT1C tem sido associada à regulação da composição lipídica de membranas e a respostas adaptativas ao estresse energético, processos centrais para a manutenção sináptica e a sobrevivência neuronal. Alterações na expressão de CPT1C foram relatadas em contextos de neurodegeneração, estresse metabólico e reprogramação metabólica de células tumorais, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de programas de sinalização dependentes de lipídios.

CPT1-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPT1C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPT1-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPT1C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPT1C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPT1-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPT1C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPT1-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPT1-C em células tumorais com expressão de CPT1C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.