cPLA₂ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422284-ACT

Pla2g4a codifica a fosfolipase A2 citosólica (cPLA2), uma enzima dependente de Ca2+ e regulada por fosforilação que hidrolisa seletivamente fosfolipídios de membrana para liberar ácido araquidônico e lisofosfolipídios. Essa etapa fornece substrato para as vias da ciclooxigenase e da lipoxigenase, modulando a produção de eicosanoides e a sinalização inflamatória e imune subsequente. A atividade da cPLA2 integra-se à sinalização MAPK/ERK, ao fluxo de Ca2+ e à dinâmica do tráfego de membranas, influenciando respostas de citocinas, estresse oxidativo e função de barreira. A desregulação da sinalização PLA2G4A/cPLA2 tem sido associada à patobiologia inflamatória, a respostas ao estresse metabólico e a processos neuroinflamatórios, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos murinos.

cPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pla2g4a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pla2g4a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pla2g4a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cPLA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pla2g4a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cPLA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cPLA2 em células tumorais com expressão de Pla2g4a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.