copine 8 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-426239-ACT

マウスCpne8は、C2ドメインと、制御された膜結合を担うAドメインを含むカルシウム依存性のリン脂質結合タンパク質であるコピン8（copine 8）をコードします。コピンファミリーのメンバーは、形質膜およびエンドメンブレン区画におけるカルシウム誘導性シグナル伝達イベントに関与し、小胞輸送、膜リモデリング、タンパク質リクルートの動態に影響を与えることが示唆されています。Ca2+フラックスを膜近傍でのタンパク質間相互作用に結び付けることで、コピン8は受容体のターンオーバーや細胞内シグナルの強度を規定する経路に関連します。カルシウム制御や膜トラフィッキングネットワークの制御異常は、神経コミュニケーション、免疫シグナル、ストレス応答などの文脈で頻繁に研究されており、Cpne8は機序解明のための経路解析に有用な標的となります。

copine 8 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cpne8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

copine 8 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cpne8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCpne8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性copine 8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCpne8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcopine 8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCpne8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcopine 8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。