copine 8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426239-ACT

O gene Cpne8 de camundongo codifica a copina 8, uma proteína de ligação a fosfolipídios dependente de cálcio, contendo domínios C2 e um domínio A que permite associação regulada à membrana. Membros da família das copinas estão implicados em eventos de sinalização desencadeados por cálcio na membrana plasmática e em compartimentos endomembranares, influenciando o tráfego vesicular, a remodelação de membranas e a dinâmica de recrutamento de proteínas. Ao acoplar fluxos de Ca2+ a interações proteicas próximas à membrana, a copina 8 é relevante para vias que modulam a renovação de receptores e a amplitude da sinalização intracelular. A regulação alterada das redes de cálcio e de tráfego de membranas é frequentemente estudada em contextos como comunicação neuronal, sinalização imune e respostas ao estresse, tornando Cpne8 um alvo útil para investigações mecanísticas de vias.

copine 8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cpne8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

copine 8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cpne8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cpne8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de copine 8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cpne8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de copine 8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via copine 8 em células tumorais com expressão de Cpne8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.