COL8A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419753

Panoramica

Col8a1 codifica il collagene di tipo VIII catena alfa 1 (COL8A1), un collagene non fibrillare della matrice extracellulare, arricchito nelle matrici associate alla membrana basale e nei tessuti connettivi associati ai vasi. COL8A1 contribuisce all’assemblaggio della matrice, all’adesione cellula–matrice e alla regolazione di comportamenti cellulari quali migrazione e proliferazione, tramite interazioni con le integrine e reti di rimodellamento che coinvolgono l’attività delle MMP. Nei sistemi murini, l’alterazione dell’espressione di Col8a1 e la deposizione del collagene VIII sono spesso studiate nel contesto del rimodellamento vascolare, dell’accumulo di matrice fibrotica e della riorganizzazione della matrice extracellulare associata alle ferite. Questi processi si intersecano con programmi responsivi al TGF-β e con vie più ampie della matrice extracellulare che modellano l’architettura tissutale e i microambienti infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL8A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Col8a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Col8a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Col8a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL8A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Col8a1 per lo studio della segnalazione di COL8A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Col8a1 critici per la funzione di COL8A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Col8a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal COL8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Col8a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL8A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR COL8A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Col8a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Col8a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.