COL6A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403209-ACT

COL6A2は、細胞外マトリックスタンパク質であるVI型コラーゲンのα2鎖をコードしており、ビーズ状の微小線維へと組み立てられ、結合組織における細胞周囲マトリックスの構築・秩序化に寄与します。他のコラーゲン、プロテオグリカン、細胞表面受容体との相互作用を介して、COL6A2はマトリックスのリモデリング、細胞接着、ならびに生存・分化プログラムに影響するメカノトランスダクションに関与します。その機能は、細胞外マトリックス—受容体シグナル伝達や細胞骨格制御と交差し、線維化、組織の健全性、間質の組織化といった過程を形作ります。COL6A2の発現やマトリックス沈着の異常は、結合組織疾患や神経筋疾患の病態と関連しており、腫瘍微小環境のリモデリングや線維化経路の文脈でも頻繁に研究されています。

COL6A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL6A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL6A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL6A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL6A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL6A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL6A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL6A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL6A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL6A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。