Plásmido Doble Nickase (h) COL5A1: sc-401579-NIC

COL5A1 codifica la cadena alfa 1 del colágeno tipo V, un colágeno fibrilar cuantitativamente minoritario pero funcionalmente crucial que regula la fibrilogénesis del colágeno y controla el diámetro y la organización de las fibras de colágeno tipo I/V en la matriz extracelular. A través de su papel en el ensamblaje de la matriz, COL5A1 influye en la señalización célula–matriz, la resistencia tensil de los tejidos y los procesos de remodelación que se relacionan con la adhesión mediada por integrinas y con vías que regulan el comportamiento de los fibroblastos. Las alteraciones en la función o la expresión de COL5A1 se asocian con trastornos hereditarios del tejido conectivo, incluido el síndrome de Ehlers–Danlos clásico, y se estudian con frecuencia en contextos de mecánica de la piel y los tendones, integridad vascular y desregulación de la matriz. Como determinante estructural de la MEC, también es relevante para investigar cómo la arquitectura del colágeno modula el desarrollo, la reparación de heridas y las contribuciones del estroma a los fenotipos de enfermedad.

COL5A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL5A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL5A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL5A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL5A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.