COL5A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401579-ACT

COL5A1はV型コラーゲンのpro‑α1(V)鎖をコードしており、I型コラーゲンと共に共重合してコラーゲン線維形成（フィブリロジェネシス）および細胞外マトリックス（ECM）の構築を制御する線維性コラーゲンです。コラーゲン線維の核形成や線維径を調節することで、COL5A1は結合組織の引張強度、細胞―マトリックス接着、ならびに組織の発生・再構築を形作るメカノトランスダクション（機械刺激応答）プログラムに影響を与えます。COL5A1に関連するECMの組織化は、インテグリン/FAKシグナル伝達やTGF‑βに関連したマトリックス沈着など、創傷修復や間質リモデリングを司る経路とも交差します。COL5A1の遺伝学的な異常は遺伝性結合組織疾患に関与するとされ、またその発現変動は線維化や腫瘍微小環境の生物学においてもしばしば研究対象となります。

COL5A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL5A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL5A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL5A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL5A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL5A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL5A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL5A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL5A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL5A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。