COL1A2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400598-NIC

COL1A2は、I型コラーゲンのpro-α2鎖をコードする遺伝子である。I型コラーゲンは主要な線維性コラーゲンで、COL1A1とヘテロ三量体を形成し、骨、腱、真皮、その他の結合組織における細胞外マトリックス（ECM）の構造的足場を構築する。I型コラーゲンの生合成と成熟には、プロコラーゲンのプロセシング、三重らせん形成、分泌、細胞外での線維形成が関与し、インテグリンを介した接着、メカノトランスダクション、マトリックス・リモデリング経路と協調して進行する。COL1A2の発現量や配列が変化すると、コラーゲン線維の組織化やマトリックスの硬さが乱れ、組織の健全性が損なわれるとともに、筋骨格系や線維化の文脈における細胞―マトリックス間シグナル伝達にも影響を及ぼし得る。ECMの中核成分として、COL1A2は骨芽細胞分化、創傷修復、間質（ストローマ）生物学、ならびにマトリックス駆動性の増殖因子利用可能性の制御に関する研究でしばしば取り上げられる。

COL1A2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL1A2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL1A2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL1A2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL1A2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。