COL11A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403512-ACT

COL11A1はXI型コラーゲンのα1鎖をコードしており、量的には少ないものの構造的に重要な線維性コラーゲンとして、結合組織におけるコラーゲン線維の核形成、線維径、ならびに細胞外マトリックス（ECM）の組織化を制御します。COL11A1はII型およびIX型コラーゲンとともにヘテロ型線維に組み込まれ、軟骨の生体力学的特性を支えると同時に、組織構築を形作る細胞―マトリックス接着、遊走、機械受容伝達（メカノトランスダクション）経路にも影響します。COL11A1の発現変化やECMリモデリングは発生過程の骨格表現型と関連し、さらに腫瘍随伴間質プログラムとも結び付けられており、マトリックス組成が浸潤に関わるシグナル伝達を調節し得ることが示されています。マトリックス構成要素として、COL11A1はECMの組み立て、軟骨形成、そして微小環境依存的な細胞挙動の制御という文脈で頻繁に研究されています。

COL11A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL11A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL11A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL11A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL11A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL11A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL11A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL11A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL11A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL11A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。