Cofilin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400394-ACT

CFL1はコフィリン1をコードしており、Fアクチンに結合して切断および脱重合を促進することで、迅速な細胞骨格リモデリングを支えるアクチンフィラメント・ターンオーバーの中枢的調節因子である。その活性はリン酸化依存的なシグナル伝達や、Rho GTPase–LIMK–SSHなどの上流経路によって厳密に制御され、ラメリポディア形成、細胞極性、細胞質分裂、エンドサイトーシスを協調的に制御する。アクチン動態を形成することで、コフィリン1は細胞移動、接着、メカノトランスダクションにも影響し、これらの過程はがんの浸潤・転移に加え、心血管および炎症の文脈でもしばしば破綻する。さらに、コフィリンのシグナル異常やアクチンリモデリングの破綻は、シナプス機能障害モデルで報告されている異常なアクチン–コフィリン凝集体など、神経変性様の表現型とも関連づけられている。

Cofilin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CFL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cofilin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CFL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCFL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cofilin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCFL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCofilin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCFL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCofilin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。