CNT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409209-ACT

SLC28A2は、濃縮型ヌクレオシドトランスポーター2（CNT2）をコードする。CNT2は高親和性かつナトリウム依存性のトランスポーターであり、アデノシンやイノシンなどのプリンヌクレオシドを、細胞膜を介して細胞内へ取り込む働きを担う。ヌクレオシドのサルベージ経路および細胞内ヌクレオチドプールを制御することで、CNT2はエネルギー代謝、核酸合成、ならびに細胞ストレス応答を形作るプリン作動性シグナル伝達経路に影響を与える。CNT2の活性は、腸管や腎臓などヌクレオシドのフラックスが高い組織で特に重要であり、ヌクレオシド類似体の取り扱いが主要な変動要因となる薬理学・毒性学の文脈にも関与する。ヌクレオシド輸送の破綻は、代謝状態の変化や疾患に伴うヌクレオチド恒常性のリモデリングと関連づけられており、SLC28A2は輸送に駆動される経路変化の機序研究に有用な標的である。

CNT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC28A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CNT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC28A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC28A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CNT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC28A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCNT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC28A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCNT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。