CMTM4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405296-NIC

CMTM4（CKLF様MARVEL膜貫通ドメイン含有タンパク質4）は、エンドソームおよび細胞膜コンパートメントに局在する多回膜貫通型タンパク質で、膜構造の組織化や小胞輸送に関与します。CMTM4はそのMARVELドメインを介して、受容体のターンオーバーや安定性の制御に関連づけられており、PD-L1の細胞表面発現への影響を通じた免疫チェックポイントシグナルの調節も含まれます。これらの働きにより、CMTM4はエンドサイトーシス、膜動態、そして細胞間相互作用に影響を与える免疫関連シグナル伝達経路の接点に位置づけられます。CMTM4の発現や機能の破綻は、腫瘍の免疫回避やより広範な免疫調節表現型との関連で研究されており、腫瘍学および免疫学モデルにおける機構解明研究において重要な対象となっています。

CMTM4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CMTM4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CMTM4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CMTM4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CMTM4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。