Plasmide Double Nickase (h) CMTM4: sc-405296-NIC

CMTM4 (protéine 4 contenant un domaine transmembranaire MARVEL de type CKLF) est une protéine membranaire multipasse qui se localise dans les compartiments endosomaux et à la membrane plasmique, et qui contribue à l’organisation membranaire ainsi qu’au trafic vésiculaire. Via son domaine MARVEL, CMTM4 a été associée à la régulation du renouvellement et de la stabilité des récepteurs, notamment à la modulation de la signalisation des points de contrôle immunitaires par ses effets sur l’expression de PD‑L1 à la surface cellulaire. Ces fonctions placent CMTM4 à l’interface de l’endocytose, de la dynamique membranaire et de voies de signalisation liées à l’immunité qui influencent les interactions cellule–cellule. Une expression ou une fonction dérégulée de CMTM4 a été étudiée dans le contexte de l’échappement immunitaire tumoral et de phénotypes immunorégulateurs plus larges, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles d’oncologie et d’immunologie.

CMTM4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CMTM4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CMTM4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CMTM4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CMTM4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.