CMTM4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405296-ACT

CMTM4 (proteína 4 contendo domínio transmembranar MARVEL semelhante à CKLF) é uma proteína de membrana multipasso da família CMTM, implicada na regulação da organização de membranas, do tráfego endossomal e de vias de sinalização relacionadas à imunidade. Por meio do seu domínio MARVEL, a CMTM4 contribui para o controle da estabilidade e da renovação (turnover) de proteínas de superfície, incluindo a modulação da abundância de PD-L1 por vias endossomo–lisossomo, influenciando assim a comunicação célula–célula e mecanismos de evasão imune. A expressão de CMTM4 tem sido associada a programas de diferenciação celular e respostas ao estresse, e alterações em sua regulação foram relatadas em múltiplos contextos de câncer. Essas propriedades tornam a CMTM4 um nó útil para estudar o tráfego de membranas, a regulação de checkpoints imunológicos e as interações tumor–sistema imune em sistemas modelo humanos.

CMTM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CMTM4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CMTM4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CMTM4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CMTM4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CMTM4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CMTM4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CMTM4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CMTM4 em células tumorais com expressão de CMTM4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.