CLIP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413231-ACT

CLIP4 (proteína 4 ligadora contendo domínio CAP-Gly) codifica um fator associado ao citoesqueleto, implicado na regulação da dinâmica dos microtúbulos e da organização intracelular por meio de interações com a tubulina e com redes das extremidades positivas dos microtúbulos. Ao influenciar a estabilidade dos microtúbulos e a coordenação espacial do citoesqueleto, o CLIP4 pode afetar processos como o tráfego de vesículas, a polaridade celular e a progressão mitótica. A expressão alterada ou o controle citoesquelético desregulado são comumente associados a migração celular aberrante e fenótipos proliferativos, tornando o CLIP4 um alvo relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em outros distúrbios que envolvem remodelamento do citoesqueleto. Pesquisas sobre CLIP4 também apoiam a investigação do crosstalk entre a regulação de microtúbulos e programas de sinalização que ajustam a forma celular e a adesão.

CLIP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLIP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLIP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLIP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLIP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLIP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLIP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLIP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLIP4 em células tumorais com expressão de CLIP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.