CLEC-2D Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412035-LAC

CLEC2D codifica per CLEC-2D, un ligando di tipo lectina C (C-type lectin-like) che interagisce con il recettore inibitorio KLRB1/CD161 sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T, contribuendo a una regolazione della citotossicità e della produzione di citochine simile a quella dei checkpoint immunitari. Modellando il crosstalk tra cellule NK e T a livello della superficie cellulare, CLEC-2D influenza il riconoscimento immunitario in microambienti infiammatori e associati al tumore e può incidere sulle risposte allo stress cellulare. Un’alterata espressione di CLEC2D è stata associata a fenotipi di evasione immunitaria e a un’infiammazione tissutale deregolata, rendendolo rilevante per studi su immunosorveglianza, tolleranza e programmi di attivazione dei leucociti. La funzione di CLEC-2D viene comunemente indagata in contesti che collegano la segnalazione ligando–recettore a cambiamenti trascrizionali nelle cellule effettrici e nei compartimenti presentanti l’antigene o stromali.

Le particelle di attivazione lentivirale CLEC-2D (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CLEC2D in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CLEC-2D (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CLEC2D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CLEC-2D. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CLEC2D e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.