CLEC-2D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412035

Panoramica

CLEC2D codifica CLEC-2D, un ligando di tipo II transmembrana con dominio tipo lectina C che modula la sorveglianza immunitaria legandosi al recettore inibitorio KLRB1/CD161 sulle cellule NK e su sottopopolazioni di cellule T. Attraverso questo asse, CLEC-2D può influenzare la funzione effettrice citotossica, la produzione di citochine e la comunicazione cellula–cellula alle interfacce tra sistema immunitario e tessuti. L’espressione di CLEC2D è regolata dinamicamente dallo stress cellulare e dagli stati di differenziamento, collegandola a vie che governano l’elusione immunitaria, l’infiammazione e le interazioni tumore–sistema immunitario. Un’alterata segnalazione di CLEC2D è stata riportata in molteplici neoplasie e contesti infiammatori, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per studiare la regolazione delle cellule NK/T in sistemi umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-2D (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLEC2D in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLEC2D insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLEC2D a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLEC-2D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLEC2D per lo studio della segnalazione di CLEC-2D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLEC2D critici per la funzione di CLEC-2D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLEC2D per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CLEC-2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CLEC-2D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLEC2D. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CLEC-2D Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CLEC-2D (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLEC2D per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLEC2D definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.