CLEC-2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412035

概要

CLEC2DはCLEC-2Dをコードしており、CLEC-2DはII型膜貫通型のC型レクチン様リガンドです。NK細胞および一部のT細胞に発現する抑制性受容体KLRB1/CD161に結合することで免疫監視を調節します。このリガンド—受容体軸を介して、CLEC-2Dは免疫—組織境界における細胞傷害性エフェクター機能、サイトカイン産生、ならびに細胞間コミュニケーションを形成し得ます。CLEC2Dの発現は細胞ストレスや分化状態によって動的に制御され、免疫回避、炎症、腫瘍—免疫相互作用を司る経路との関連が示されています。CLEC2Dシグナルの異常は複数の悪性腫瘍や炎症性の状況で報告されており、ヒトの系におけるNK/T細胞制御を研究するうえでの機構的ハブとしての有用性が支持されています。

CLEC-2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLEC2D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLEC2D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLEC2Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLEC-2Dタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLEC-2Dシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLEC2D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLEC-2Dの機能に不可欠なCLEC2Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLEC2Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLEC-2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCLEC-2D CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLEC2D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLEC-2D HDRプラスミド（h）および CLEC-2D HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLEC2Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLEC2D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。