CLC-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403513-ACT

ヒトCLCN2は電位依存性塩化物チャネルであるCLC-2をコードしており、CLC-2は形質膜およびエンドメンブレンに局在するトランスポーターとして、塩化物コンダクタンス、膜電位の安定化、ならびに上皮におけるイオン・水分恒常性の維持を支えます。CLC-2活性は経上皮輸送プロセスに寄与し、細胞容積制御や電気的興奮性の調節因子として作用する細胞内塩化物に依存したシグナル伝達プログラムとも連携します。神経系では、CLC-2が塩化物の取り扱いに影響を与え、細胞内外の塩化物勾配を調節することで抑制性神経伝達の形成に関与し得ます。CLCN2の発現異常またはチャネル機能の破綻は、神経学的表現型や白質脳症と関連づけられており、上皮バリア生理やイオン輸送障害の研究にも関連します。

CLC-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLCN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLC-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLCN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLCN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLC-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLCN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLC-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLCN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLC-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。