claudin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400609

Panoramica

CLDN1 codifica la claudina-1, un componente integrale di membrana dei filamenti delle tight junctions (giunzioni serrate) che regola l’integrità della barriera epiteliale, la permeabilità paracellulare e la polarità apico-basale. La claudina-1 partecipa all’organizzazione e alla segnalazione delle giunzioni attraverso interazioni con proteine scaffold come ZO-1, influenzando la dinamica del citoscheletro e vie legate all’omeostasi epiteliale, inclusi i programmi Wnt/β-catenina e quelli associati all’EMT. Un’alterata espressione o localizzazione di CLDN1 è associata a disfunzione della barriera e a processi infiammatori, ed è frequentemente studiata in contesti di trasformazione epiteliale, invasione e metastasi in diversi carcinomi. In quanto determinante giunzionale, la claudina-1 è ampiamente utilizzata come marcatore e nodo meccanicistico per investigare la segnalazione dipendente dall’adesione e l’architettura tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLDN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLDN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLDN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina claudin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLDN1 per lo studio della segnalazione di claudin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLDN1 critici per la funzione di claudin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLDN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal claudin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal claudin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLDN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal claudin-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR claudin-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLDN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLDN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.